Google

       Pricelist 2010 

redcoon BelgiŰ GENTAUR BVBA

VAT BE0473327336

Av. de l Armee 68 B4

1040 Brussels BELGIUM

  Tel + 32 16 58 90 45 

Fax + 32 16 50 90 45

GENTAUR France SARL

SIRET 48423788800017

Rue Lagrange, 9

75005 Paris, France

 Tel 01 43 25 01 50

Fax 01 43 25 01 60 

GENTAUR Germany

Marienbongard 20

52074 Aachen, Germany

Tel  0241 56 00 99 68                   

Fax 0241 56 00 47 88 

GENTAUR Pol Sp. Z.o.o.

Ulica Ogarna 15/19B m2

80-826 GDANSK

Tel 00 48 58 760 77 08

Fax: 00 32 16 50 90 45

GENTAUR Italy

23015 Milano, Italy

 Tel 02 36 00 65 93

Fax 02 36 00 65 94

Českß republika Praha
+420246019719
 

Danmark

+4569918806 

Finland Helsset
+358942419041

Ελλάς Αθήνα
+302111768494
 

Ireland Dublin
+35316526556
 

Luxembourg
+35220880274
 

Magyarorszßg Budapest
+3619980547
 

Nederland
+31208080893
 

Norge Oslo
+4721031366
 

Ísterreich
+43720880899
 

Sverige Stockholm
+46852503438
 

Schweiz ZŘri
+41435006251
 

 

Northern America 

Canada Montreal
+15149077481
 

US New York
+17185132983

 

Other Countries redcoon BelgiŰ
0032 (0)16 41 44 07

OUR SUPPLIERS

KOMABIOTECH
301, Gayang Technotown, #1487 Gayang 3 dong, Gangseo-gu
Seoul 157-793, KOREA

Sacace Biotechnologies S.r.l.
Via Scalabrini, 44
22100 Como Italy

Spherotech, Inc.
27845 Irma Lee Circle, Unit 101
Lake Forest, IL 60045

Exalpha Biologicals, Inc.
2 Shaker Road, Unit B101
Shirley, MA 01464

SCETI K.K
BIOSCIENCE
Export                                   DF Kasumigaseki Place,3-6-7 Kasumigaseki Chiyoda-ku, Tokyo 100-0013 JAPAN 

EY Laboratories, Inc. Headquarters
107 N. Amphlett Blvd
San Mateo, CA. 94401 USA

EXBIO Praha, a.s.
Nad Safinou II 366
252 42  Vestec
Czech Republic

 

 

Human Amylin ELISA KIT 96-Well Plate

(Cat. # EZHA-52K) 96-Well Plate (Cat. # Ezha-52K)

 I. Intended Use I. Beoogd gebruik 2 2 II.

II. Principles Of Procedure Beginselen van procesrecht 2 2

III. III. Reagents Supplied Reagentia Geleverd 2 2

IV. IV. Storage and Stability Opslag en stabiliteit 3 3

V. Reagent Precautions V. Reagens Voorzorgsmaatregelen 3 3 VI. VI. Materials Required But Not Provided Benodigde maar niet bijgeleverde 3 3

VII. VII. Sample Collection And Storage Proef inzameling en opslag 4 4

VIII. VIII. Assay Procedure Gehalte Procedure 4 4 IX. IX. Microtiter Plate Arrangement Microtiterplaat Arrangement 5 5 X. Calculations X. Berekeningen 5 5 XI. XI. Assay Characteristics Gehalte Kenmerken 5 5

XII. XII. Troubleshooting Guide Troubleshooting Guide 8 8

XIII. XIII. Replacement Reagents Vervanging Reagentia 8 8 XIV. XIV. Ordering Information Bestelinformatie 9 9 XV. XV. References Referenties 9 9 XVI. XVI. Kits Available by Linco Research, Inc. Kits Beschikbaar per Linco Research, Inc 10 10
--------------------------------------------------------------------------------
Page 2 Page 2
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 2 2 Human Amylin ELISA KIT Human Amylin ELISA KIT 96-Well Plate (Cat. # EZHA-52K) 96-Well Plate (Cat. # Ezha-52K) I. I. INTENDED USE BESTEMMING This kit is for non-radioactive quantification of Human Amylin in plasma. Deze kit is voor niet-radioactieve kwantificering van de mens Amylin in het plasma. The capture antibody requires an Het capture antilichaam vereist een intact disulfide bond between positions 2 and 7 of the peptide. intact disulfide binding tussen posities 2 en 7 van het peptide. One kit is sufficient to measure 39 unknown Een set is voldoende om 39 onbekende meten samples in duplicate. This kit is for research purposes only. monsters in tweevoud. Deze kit is alleen voor onderzoeksdoeleinden. II. II. PRINCIPLES OF PROCEDURE BEGINSELEN VAN ORDE The Human Amylin ELISA is a monoclonal antibody-based sandwich immunoassay for determining De Human Amylin Elisa is een monoklonaal antilichaam-gebaseerde sandwich immunoassay voor de bepaling amylin levels in human plasma. amyline niveaus in menselijk plasma. The capture antibody recognizes human amylin, amylin acid (deamidated Het capture antilichaam herkent menselijke amyline, amyline zuur (deamidated amylin), a 1-20 fragment of amylin, but not reduced amylin. amyline), een fragment van 1-20 amyline maar niet verminderd amyline. The detection antibody binds to reduced or De detectie antilichaam bindt aan verminderd of unreduced human amylin but not amylin acid and is complexed with streptavidin-alkaline phosphatase. onverminderde amyline menselijk, maar niet amyline zuur en is gecomplexeerd met streptavidine-alkalische fosfatase. The De substrate, 4-Methylumbelliferyl Phosphate (MUP), is applied to the completed sandwich and the substraat, 4-Methylumbelliferyl fosfaat (MUP), wordt toegepast op de voltooide sandwich en de fluorescent signal, monitored at 355 nm/460 nm, is proportional to the amount of amylin present in the fluorescente signaal, nm/460 gecontroleerd op 355 nm, is evenredig aan het bedrag van amyline aanwezig in de sample. monster. III. III. REAGENTS SUPPLIED REAGENTIA GELEVERDE Each kit is sufficient to run one 96-well microtiter plate and contains the following reagents: Elke kit is voldoende om een 96-run goed microtiterplaat en bevat de volgende reagentia: A. A. Microtiter Plate Microtiterplaat Coated with Mouse anti-Human Amylin Antibody Bekleed met muis anti-humaan antilichaam Amylin Quantity: 1 plate Hoeveelheid: 1 plaat Preparation: Ready to use Bereiding: Klaar voor gebruik B. B. Adhesive Plate Sealer Plate Adhesive Sealer Quantity: 1 Sheet Aantal: 1 vel Preparation: Ready to use Bereiding: Klaar voor gebruik C. C. Wash Buffer Concentrate 10X Wash Buffer Concentraat 10X 10X concentrate of 50 mM Tris Buffered Saline with Tween 20 and Sodium Azide 10X concentraat van 50 mM Tris-gebufferde fysiologische zoutoplossing met Tween 20 en Natriumazide Quantity: 30 ml Hoeveelheid: 30 ml Preparation: Dilute 1:10 with deionized water Bereiding: verdunnen 1:10 met gede´oniseerd water D. D. Standards Normen Human Amylin in Assay Buffer: 0, 1, 2, 5, 10, 40 and 100 pM Human Amylin in Gehalte Buffer: 0, 1, 2, 5, 10, 40 en 100 pm Quantity: Lyophilized, 250 Ál /vial rehydrated Aantal: Gelyofiliseerde, 250 ĩl / injectieflacon gerehydrateerd Preparation: Reconstitute with 250 Ál deionized water Bereiding: Bereid met 250 ĩl gede´oniseerd water E. E. Controls 1 and 2 Controles 1 en 2 Human Amylin in Assay Buffer. Human Amylin in Assay Buffer. Quantity: Lyophilized, 250 Ál /vial rehydrated Aantal: Gelyofiliseerde, 250 ĩl / injectieflacon gerehydrateerd Preparation: Reconstitute with 250 Ál deionized water Bereiding: Reconstitueer met 250 ĩl gede´oniseerd water F. F. Assay Buffer Gehalte Buffer 0.05M PBS, pH 7.4, containing Proprietary Protease Inhibitors, with Tween 20, 0.05M PBS, pH 7.4, met Eigendom proteaseremmers, met Tween 20, 0.08% Sodium Azide and 1% BSA 0,08% Natriumazide en 1% BSA Quantity: 6 ml Aantal: 6 ml Preparation: Ready to use Bereiding: Klaar om te gebruiken
--------------------------------------------------------------------------------
Page 3 Page 3
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 3 3 G. G. Detection Antibody Detectieantilichaam Anti-Human Amylin-Alkaline Phosphatase Conjugate Anti-Human Amylin-alkaline fosfataseconjugaat Quantity: 11 ml Hoeveelheid: 11 ml Preparation: Ready to use Bereiding: Klaar voor gebruik H. H. Substrate (Light sensitive, avoid unnecessary exposure to light) Substraat (Licht gevoelig, onnodige blootstelling aan licht) 4-Methylumbelliferyl Phosphate 4-Methylumbelliferyl Fosfaat Quantity: 10 mg Hoeveelheid: 10 mg Preparation : Hydrate in 1 ml deionized water just before use. Bereiding: Hydrate in 1 ml water gede´oniseerd vlak voor gebruik. Use at 1:200 dilution in substrate Gebruik op 1:200 verdunning in substraat diluent (eg 105 Ál hydrated substrate in 20 ml substrate diluent). oplosmiddel (bv. 105 ĩl gehydrateerd substraat in 20 ml oplosmiddel substraat). I. I. Substrate Diluent (Light sensitive, avoid unnecessary exposure to light) Substraat Diluent (Licht gevoelig, onnodige blootstelling aan licht) Quantity: 21 ml Hoeveelheid: 21 ml Preparation: Ready to use, warm to room temperature before use Bereiding: Klaar voor gebruik, op kamertemperatuur vˇˇr gebruik J. J. Stop Solution Stop Solution Quantity: 6 ml Aantal: 6 ml Preparation: Bring to room temperature before use. Bereiding: Breng op kamertemperatuur vˇˇr gebruik. Mix thoroughly to ensure no precipitate Meng grondig te zorgen geen neerslag remains. blijft. IV. IV. STORAGE AND STABILITY OPSLAG EN STABILITEIT Upon receipt, all components of the kit should be stored at 2-8░C. Na ontvangst moeten alle componenten van de kit worden bewaard bij 2-8 ░ C. Do not mix reagents from different kits Niet reagentia mix van verschillende kits unless they have the same lot numbers. tenzij zij dezelfde partij nummers. V. V. REAGENT PRECAUTIONS REAGENT VOORZORGSMAATREGELEN A. A. Diethanolamine Diethanolamine Substrate diluent contains diethanolamine. Substraat oplosmiddel bevat diethanolamine. This compound can be harmful through ingestion, Deze verbinding kan schadelijk zijn via voeding, inhalation, and skin contact. inademing en contact met de huid. May be irritating to eyes and skin. Mag irriterend voor de ogen en de huid. If skin/eye contact occurs flush Als de huid en / of oogcontact plaatsvindt spoelen thoroughly with water. grondig met water. B. B. Sodium Azide Natriumazide Sodium Azide has been added to reagents as a preservative at a concentration of 0.08%. Natriumazide is toegevoegd aan reagentia als conserveermiddel in een concentratie van 0,08%. Although it is Hoewel het at a minimum concentration, Sodium Azide may react with lead and copper plumbing to form highly bij een minimale concentratie kan, Natriumazide reageren met lood en koperen leidingen, zeer vorm explosive metal azides. explosieve metaal aziden. On disposal, flush with a large volume of water to prevent azide build up. Bij verkoop, spoelen met een grote hoeveelheid water om te voorkomen azide bouwen. VI. VI. MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED MATERIAAL MAAR NIET VOORZIEN 1. 1. Pipet with Tips, 10Ál-200Ál Pipetteer met tips, 10μl-200μl 2. 2. Multi-Channel Pipette, 50Ál-300Ál Multi-Channel Pipetteer, 50μl-300μl 3. 3. Buffer and Reagent Reservoirs Buffer en Reagens Reservoirs 4. 4. Vortex Mixer Wervelmenger 5. 5. Absorbent Paper or Cloth Absorberend papier of doek 6. 6. Refrigerator Koelkast 7. 7. Deionized Water Gede´oniseerd water 8. 8. Orbital Microtiter Plate Shaker Orbital microtiterplaat Shaker 9. 9. Fluorescence Plate Reader Fluorescentie Plate Reader
--------------------------------------------------------------------------------
Page 4 Pagina 4
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 4 4 VII. VII. SAMPLE COLLECTION AND STORAGE MONSTER verzameling en opslag 1. 1. For plasma collection, collect whole blood in ice-cooled Vacutainer« EDTA-plasma tubes. Voor plasma inzamelen, verzamelen volbloed in ijs-gekoelde Vacutainer « EDTA-plasma buizen. Centrifuge immediately at 1000 xg for 10 minutes in refrigerated centrifuge or place tubes on ice and Centrifugeer onmiddellijk bij 1000 xg gedurende 10 minuten in gekoelde centrifuge of plaats buisjes op ijs en centrifuge within one hour. centrifuge binnen een uur. 2. 2. Specimens should be stored at less than or equal to -70░C. Specimens moeten worden opgeslagen op minder dan of gelijk aan -70 ░ C. Aliquot samples before freezing if Analysehoeveelheden voor het invriezen als necessary. noodzakelijk. 3. 3. Avoid using samples with gross hemolysis or lipemia. Vermijd het gebruik van monsters met een bruto hemolyse of lipemia. VIII. VIII. ASSAY PROCEDURE TEST PROCEDURE The assay should be run in duplicate using 50 Ál Assay Buffer and 50 Ál of Standard, Control, or Sample in De test moet worden uitgevoerd in tweevoud behulp van 50 ĩl Gehalte buffer en 50 ĩl van Standard, Control, of monster each well. elk putje. 1. 1. Dilute the concentrated TBS Wash Buffer 10 fold by mixing the entire contents of the 10X Wash Verdun de geconcentreerde TBS Wash Buffer 10 maal, door het mengen van de volledige inhoud van de 10X Wash Buffer with 270 ml deionized water. Buffer met 270 ml gede´oniseerd water. 2. 2. Reconstitute Standards and QC1 and QC2 (lyophilized) vials with 250 Ál of deionized water. Reconstitueer Normen en QC1 en QC2 (gevriesdroogde) injectieflacons met 250 ĩl gede´oniseerd water. Mix Mix gently and let sit for at least 5 minutes with occasional gentle mixing to assure complete reconstitution. rustig zitten en laat minstens 5 minuten met af en toe zachtjes mengen tot volledig oplossen verzekeren. 3. 3. Remove the microtiter assay plate from the foil pouch and fill each well with 300 Ál of diluted TBS Verwijder de microtiterplaatschudder test plaat uit de folieverpakking en elk goed vullen met 300 ĩl verdunde TBS Wash Buffer. Wash Buffer. Incubate at room temperature for 10 minutes, no shaking. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten, nee schudden. 4. 4. Decant Wash Buffer from the plate and re move the residual amount from all wells by inverting the Decanteer Was Buffer van de plaat en weer bewegen de resterende bedrag van alle putjes door omkeren van de plate and tapping it smartly onto absorbent towels several times. plaat en tikken het slim op absorberende handdoeken een paar keer. Do not let wells dry before Laat waterputten drogen voordat proceeding to the next step. gaan tot de volgende stap. 5. 5. Add 50 Ál Assay Buffer to each well. Voeg 50 ĩl Gehalte buffer aan elke well. 6. 6. Add in duplicates; 50 Ál Standards, Samples and Controls. Add-in duplo, 50 ĩl Normen, monsters en controles. Refer to Section IX for suggested well Zie sectie IX voor suggereerde goed orientations. oriŰntaties. Seal plate and incubate at room temperature on the shaker for one hour. Seal plaat en incuberen bij kamertemperatuur op de shaker voor een uur. ( NOTE: Start (NB: Start incubation time as plate is loaded on the shaker, not from the time you start loading the plate incubatie tijd als plaat wordt geladen op de shaker, niet vanaf het moment dat u begint met het laden van de plaat with samples. ) Decant and remove the residual amount from all wells by inverting the plate and met samples.) Giet en verwijder het resterende bedrag van alle putjes door omkeren van de plaat en tapping it smartly onto absorbent towels several times. tikken op het slim op absorberende handdoeken een paar keer. 7. 7. Wash the plate 3 times with 300 Ál per well TBS Wash Buffer. Was de plaat 3 maal met 300 ĩl per well TBS Wash Buffer. Decant and tap after each wash to Decanteer en tik na elke wasbeurt aan remove residual buffer. verwijderen resterende buffer. 8. 8. Add 100 Ál Detection Antibody to each well. Voeg 100 ĩl detectieantilichaam voor elke well. Cover the plate with sealer and incubate on the shaker at Bedek de plaat met sealer en broeden op de shaker op room temperature for 2 hours. kamertemperatuur gedurende 2 uur. 9. 9. Near the completion of this incubation step, hydrate the Substrate (ESS-MUP) by adding 1 ml Bij de voltooiing van deze stap incubatie, hydraat het substraat (ESS-MUP) door toevoeging van 1 ml deionized water to 10 mg, mix well, and let stand 15 minutes (with occasional mixing) to assure gede´oniseerd water tot 10 mg, meng goed en laat 15 minuten staan (met af en toe menging) te verzekeren complete dissolution. volledig is opgelost. Remove 105 Ál from the reconstituted substrate and add it to the 21 ml vial of Verwijder 105 ĩl van de gereconstitueerde substraat en voeg deze toe aan de 21 ml flacon Substrate Diluent (EDD-MUP), mix well. Substraat Diluent (EDD-MUP), meng goed. Referred to as Substrate Solution from here on. Bedoeld als substraat oplossing van hier op. 10. 10. Decant Detection Antibody and remove the residual amount from all wells by inverting the plate and Decanteer detectieantilichaam en verwijder het resterende bedrag van alle putjes door omkeren van de plaat en tapping it smartly onto absorbent towels several times. tikken op het slim op absorberende handdoeken een paar keer. 11. 11. Wash the plate 3 times with 300 Ál per well TBS Wash Buffer. Was de plaat 3 maal met 300 ĩl per well TBS Wash Buffer. Decant and tap after each wash to Decanteer en tik na elke wasbeurt aan remove residual buffer. verwijderen resterende buffer. 12. 12. Add 100 Ál Substrate Solution to each well. Voeg 100 ĩl Substraat Antwoord op elke well. Incubate 15 minutes at room temperature in the dark, no Incubeer 15 minuten bij kamertemperatuur in het donker, geen shaking. schudden. 13. 13. Take a reading. Neem een lezing. Note the RFU of the top standard point; when the reading is 2000 RFU or greater, add Let op de RFU van de top-norm punt; wanneer de lezing is 2000 RFU of hoger, toe te voegen 50 Ál Stop Solution (ET-AP), gently mix, and read on the Fluorescence Plate reader after 5 minutes. 50 ĩl Stop Solution (ET-AP), meng, en lees over de fluorescentie Plate lezer na 5 minuten.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 5 Page 5
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 5 5 IX. IX. MICROTITER PLATE ARRANGEMENT Microtiterplaat ARRANGEMENT 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10 11 11 12 12 A Een 0 pM 0 pM 0 pM 0 pM 1 pM 1 pM 1 pM 1 pM 2 pM 2 pM 2 pM 2 pM 5 pM 5 pM 5 pM 5 pM 10 pM 10 pM 10 pM 10 pM 40 pM 40 pM 40 pM 40 pM B B 100 pM 100 pm 100 pM 100 pm QC 1 QC 1 QC 1 QC 1 QC 2 QC 2 QC 2 QC 2 Sample 1 Monster 1 Sample 1 Monster 1 Sample 2 Monster 2 Sample 2 Monster 2 Etc. Etc C C D D E E F F G G H H X. X. CALCULATIONS BEREKENINGEN The RFU can be fitted directly to the concentration. De RFU kan direct worden gemonteerd op de concentratie. If curve fitting software is available, the best fit Als curve fitting software beschikbaar is, de best passende can be obtained with a linear-linear spline fit. kan worden verkregen met een lineaire-lineaire spline fit. Since this assay is a direct ELISA, the RFU is directly proportional to the concentration of Human Aangezien deze test is een directe ELISA, is de RFU rechtstreeks evenredig met de concentratie van de Mens Amylin in the sample. Amylin in het monster. Note: When sample volumes assayed differ from 50 Ál, an appropriate mathematical adjustment Opmerking: Als monster kwantitatief bepaald volume verschillen van 50 ĩl, een passende wiskundige aanpassing must be made to accommodate for the dilution factor (eg, if 25 Ál of sample is used, then calculated moet worden gedaan om tegemoet voor de verdunningsfactor (bijvoorbeeld als 25 ĩl van het monster wordt gebruikt, dan berekend data must be multiplied by 2). gegevens moeten worden vermenigvuldigd met 2). XI. XI. ASSAY CHARACTERISTICS TEST KENMERKEN Sensitivity Gevoeligheid The lowest level of Human Amylin that can be detected by this assay is 1 pM (50 Ál plasma sample Het laagste niveau van de mens Amylin die kan worden gedetecteerd door deze test is 1 uur (50 ĩl plasma monster size). grootte). Performance Prestatie ED ED 80 80 = 84 ▒ 2 pM = 84 ▒ 2 pM ED ED 50 50 = 60 ▒ 4 pM = 60 ▒ 4 pM ED ED 20 20 = 32 ▒ 3 pM = 32 ▒ 3 pM Crossreactivity Crossreactivity Human Glucagon Human Glucagon <1% <1% Human GLP-1 Human GLP-1 <1% <1% Human Insulin Humane insuline <1% <1% Human Pancreatic Polypeptide Human Alvleesklier Polypeptide <1% <1% Human Adrenomedullin Human Adrenomedullin 1% 1% Human Calcitonin Human Calcitonine <1% <1% Calcitonin Gene Related Peptide Calcitonine Gene Related Peptide <1% <1% Note: This kit is suitable for the measurement of Amylin in Opmerking: Deze kit is geschikt voor het meten van Amylin in rat and feline plasma; however, the precise percent of ratten en katten plasma, maar de precieze procent van de cross-reactivity is not determined at this time. kruisreactiviteit is niet bepaald op dit moment.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 6 Page 6
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 6 6 Precision Precisie Within and Between Assay Variation Binnen en tussen Assay Variatie Sample Monster Amylin Added Amylin Added Within Binnenin Between Tussen No. Aantal pM pM % CV % CV % CV % CV 1 1 20 20 1.8 1,8 5.9 5,9 50 50 1.6 1,6 6.0 6,0 80 80 1.2 1,2 3.7 3,7 2 2 20 20 2.2 2,2 4.9 4,9 50 50 1.2 1,2 6.1 6,1 80 80 1.9 1,9 3.7 3,7 3 3 20 20 1.7 1,7 4.6 4,6 50 50 3.4 3,4 6.9 6,9 80 80 1.9 1,9 4.8 4,8 The assay variation of Linco Human Amylin ELISA kits were studied at three different spiked De assay variatie van de mens Linco Amylin ELISA kits werden bestudeerd op drie verschillende spiked concentrations of Amylin in three different human plasma samples. concentraties van Amylin in drie verschillende menselijk plasma monsters. The within variation is the mean De variatie is binnen de gemiddelde from four duplicate determinations in a single assay. vier duplo-metingen in een enkele test. The between variation is the mean value of the De variatie is tussen de gemiddelde waarde van de mean of four duplicate determinations in each plasma across six assays. gemiddelde van vier duplo-bepalingen in elke plasma in zes assays. Recovery Recovery Spike & Recovery of Human Amylin in Human Plasma Suske & Herstel van de mens Amylin in menselijk plasma Sample Monster # # Sample Monster Concentration Concentratie (pM) (pm) Amylin Amylin Added Toegevoegd (pM) (pm) % of % Van Recovery Recovery 6.14 6,14 20 20 92 92 50 50 93 93 1 1 80 80 94 94 5.75 5,75 20 20 97 97 50 50 96 96 2 2 80 80 96 96 6.85 6,85 20 20 99 99 50 50 99 99 3 3 80 80 97 97 Varying concentrations of Human Amylin were added to three human plasma samples and the amylin Verschillende concentraties van de mens Amylin werden toegevoegd aan de drie menselijke plasma-monsters en de amyline content was determined in six different ELISA assays. De inhoud was bepaald in zes verschillende ELISA-tests. The % of recovery = observed amylin Het% van de terugvordering = waargenomen amyline concentration/expected amylin concentration x 100%. concentratie / verwacht amyline concentratie x 100%.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 7 Page 7
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 7 7 Linearity Lineariteit Effect of Plasma Dilution Effect van Plasma Verdunning Sample Monster Volume Deel Expected Verwachte Observed Waargenomen % Of % Van No. Aantal Sampled Sampled pM pM pM pM Expected Verwachte 1 1 50 Ál 50 ĩl 27.9 27,9 27.9 27,9 100 100 40 Ál 40 ĩl 27.2 27,2 97 97 25 Ál 25 ĩl 30.7 30,7 110 110 10 Ál 10 ĩl 33.1 33,1 118 118 2 2 50 Ál 50 ĩl 16.6 16,6 16.6 16,6 100 100 40 Ál 40 ĩl 16.9 16,9 102 102 25 Ál 25 ĩl 16.1 16,1 97 97 10 Ál 10 ĩl 10.7 10,7 64 64 3 3 50 Ál 50 ĩl 33.4 33,4 33.3 33,3 100 100 40 Ál 40 ĩl 32.6 32,6 98 98 25 Ál 25 ĩl 25.2 25,2 76 76 10 Ál 10 ĩl 22.6 22,6 68 68 Three human plasma samples with the indicated sample volumes were assayed in six different assays. Drie menselijk plasma monsters met de aangegeven monster volumes kwantitatief bepaald in zes verschillende tests. Required amount of assay buffer was added to compensate for lost volumes below 50 Ál. Benodigde hoeveelheid assay buffer werd toegevoegd als compensatie voor de verloren hoeveelheden van minder dan 50 ĩl. The De resulting dilution factors of 1.0, 1.25, 2.0, and 5.0 representing 50 Ál, 40 Ál, 25 Ál, and 10 Ál sample gevolg verdunningsfactoren van 1.0, 1.25, 2.0, en 5.0 die 50 ĩl, 40 ĩl, 25 ĩl en 10 ĩl monster volumes assayed, respectively, were applied in the calculation of observed amylin concentrations. volumes kwantitatief bepaald, werden toegepast in de berekening van de waargenomen amyline concentraties. % expected = observed/expected x 100%. % Verwacht = waargenomen / verwachte x 100%.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 8 Page 8
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 8 8 XII. XII. Troubleshooting Guide Troubleshooting Guide Low or No Signal with Standards Laag of geen signaal aan de normen * Insufficient time for reaction with substrate. * Onvoldoende tijd voor reactie met substraat. Allow substrate to react longer. Laat substraat om langer te reageren. * Kit reagents have expired. * Kit reagentia zijn verstreken. * Inadequate plate washing after sample incubation. * Onvoldoende plaat wassen na incubatie monster. * Too much washing after conjugate incubation can reduce signal. * Te veel wassen na conjugaat incubatie kan verminderen signaal. High Background Hoog Achtergrond * Inadequate plate washing. * Onvoldoende plaat wassen. After conjugate incubation, tap out plate on absorbent towels after Na conjugaat incubatie, tikt out plaat op absorberende handdoeken na decanting. decanteren. * Plate was not kept in dark after substrate addition. * Plaat werd niet bewaard in een donkere ondergrond na toevoeging. * Cross contamination between neighboring wells. * Cross besmetting tussen naburige putten. * Substrate has been diluted too long or exposed to light before use, or diluent has been * Ondergrond is verdund te lang of blootgesteld aan licht voor gebruik, of verdunningsmiddel is contaminated with old substrate. verontreinigd met oude substraat. Samples too High Monsters te hoog * Dilute sample with Assay Buffer to bring Human Amylin concentration within standard range. * Verdun het monster met Gehalte Buffer Human Amylin concentratie brengen standaard binnen bereik. Signal too High on Highest Standard Signaal te hoog op de hoogste standaard * Plate incubated too long with substrate. * Plate ge´ncubeerd te lang met substraat. Discard substrate, wash plate once and add freshly Gooi substraat, wassen plaat eens en voeg vers prepared substrate. bereid substraat. Check RFU in less time. Check RFU in minder tijd. High Variance in RFU of Duplicates Hoge Variatie in RFU van duplicaten * Cross contamination in wells * Kruisbesmetting in putten * Bubbles in substrate at time of reading * Bubbles in de ondergrond op het moment van het lezen * Loss of reagent or faulty pipetting in duplicates * Verlies van reagens of gebrekkige pipetteren in duplo XIII. XIII. REPLACEMENT REAGENTS VERVANGING REAGENTIA Reagents Reagentia Cat. Kat. # # Microtiter Plates Microtiterplaten EP52 EP52 Adhesive Plate Sealer Plate Adhesive Sealer Wash Buffer Concentrate 10x Wash Buffer Concentraat 10x EWB-TR EWB-TR Standards Normen E8051-K E8051-K ELISA Quality Controls 1 & 2 ELISA Quality Controls 1 & 2 E6051 E6051 Assay Buffer Gehalte Buffer AB-A AB-A Detection Conjugate Detectie Conjugate E1051 E1051 Substrate Substraat ESS-MUP ESS-MUP Substrate Diluent Substraat Diluent EDD-MUP EDD-MUP Stop Solution Stop Solution ET-AP ET-AP
--------------------------------------------------------------------------------
Page 9 Page 9
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 9 9 XIV. XIV. ORDERING INFORMATION BESTELINFORMATIE XV. XV. REFERENCES REFERENTIES 1. 1. Tijsen P. ôPractice and Theory of Enzyme Immunoassaysö in Bu rdon RH and Tijsen P. "Praktijk en theorie van Enzym Immunoassays in Bu rdon RH en Knippenberg PH (Ed.), Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Knippenberg PH (Ed.), Laboratorium technieken in de Biochemie en Moleculaire Biology. Biologie. Amsterdam/NY: Elsevier, 1985 Amsterdam / New York: Elsevier, 1985 2. 2. Christopoulos TK and Diamandis EP. Christopoulos Diamandis TK en EP. ôFluorescence Immunoassaysö in Diamandis EP and "Fluorescentie Immunoassays" in Diamandis EP en Christopoulos TK (Ed.), Immunoassay. Christopoulos TK (Ed.), Immunoassay. Academic Press, 1996 Academic Press, 1996 3. 3. Percy A, Rittenhouse J, Trainor D, Phelps J, and Koda J.: Development of Sensitive Immunoassays to Percy A, Rittenhouse J, Trainor D, Phelps J en J. Koda: Ontwikkeling van Sensitive Immunoassays aan Detect Amylin and Amylin-Like Peptides in Untreated Plasma. Detect Amylin en Amylin-Like Peptiden in Onbehandeld Plasma. Clinical Chemistry 42:4 , pp 576-585 Clinical Chemistry 42:4, pp 576-585 4. 4. Phelps, et al., ôDevelopment and Characterization of Monoclonal Antibodies Specific for Amylinö Phelps, et al.., "Ontwikkeling en karakterisering van monoklonale antilichamen Specifiek voor Amylin" Hybridoma. Hybridoma. Vol 15 No 5, pp 379-386 Vol 15 No 5, pp 379-386
--------------------------------------------------------------------------------
Page 10 Page 10
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 10 10 XVI. XVI. KITS AVAILABLE FROM LINCO RESEARCH, INC. KITS BESCHIKBAAR VANAF Linco RESEARCH, INC Human Leptin Human Leptine Human Insulin Specific Menselijke insuline Specifieke Sensitive Human Leptin Gevoelige Human Leptine Ultra Sensitive Human Insulin Ultra Sensitive menselijke insuline Mouse Leptin Muis Leptine Human Proinsulin Mens de pro Multi Species Leptin Multi Soort Leptine Canine C-Peptide Canine C-Peptide Rat Leptin Rat Leptine Human C-Peptide Human C-peptide Primate Leptin Primate Leptine Porcine C-Peptide Varkens C-Peptide Rat Insulin Rat Insuline Rat C-Peptide Rat C-Peptide Sensitive Rat Insulin Gevoelige Rat Insuline Glucagon Glucagon Porcine Insulin Varkens Insuline Glucagon Like Peptide-1 (Total) Glucagon-like peptide-1 (Totaal) Lispro Insulin Insuline lispro Glucagon Like Peptide-1 (Active) Glucagon-like peptide-1 (Actief) RIA or ELISA RIA of Elisa